熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。
其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是~,發(fā)射波長掃描范圍~。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
它的來光路有兩套分光系統(tǒng)自,分別的激發(fā)和發(fā)射光分光系統(tǒng),光傳播方向是互垂直的.繪制譜圖方法:1.激發(fā)波長不變,以發(fā)射波長進行掃描;2.發(fā)射波長不變,以激發(fā)波長進行掃描.要到最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長,都要做這兩種掃描。
熒光分光光度計有什么優(yōu)缺點
優(yōu)點:靈敏度高,可以用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析,
而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,
從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。1、熒光的光強并不高,所以呈線性情況有時不很理想;
2、某些反應熒光持續(xù)的時間較短;
3、熒光的發(fā)散方向不集中,不像透射光那樣集中,強度高;
4、受某些離子的干擾影響,熒光會湮滅,試驗速度必須要快。
熒光分光光度計與熒光光度計有什么樣的區(qū)別
熒光測定需要單色性較高的激發(fā)光,通常會在光束進入樣品之前經(jīng)單色器分光內(nèi),保留所感興趣容的激發(fā)波長或波段。
較常見的單色器為棱鏡或是光柵,在一些簡易的熒光系統(tǒng)中也可使用濾波片。在該系統(tǒng)中,由激發(fā)光源發(fā)出的光經(jīng)激發(fā)單色器分光獲得特定波長的激發(fā)光,然后射入樣品池,激發(fā)熒光物質(zhì)的熒光發(fā)射。
熒光分光光度計與熒光光度計的區(qū)別在于兩者之間的分光系統(tǒng),前者可以采用色散型單色器,可對入射和發(fā)射光波長進行選擇,可進行入射/發(fā)射波長掃描,多見于大型通用儀器;后者采用濾光片,具有固定的光譜通帶,一般用于專用儀器中。
熒光分光光度計常用的光源是什么
看你分光光度計的波長范圍。以上的用高級白熾燈,有短波的加氘燈。
熒光分光光度計原理及結(jié)構(gòu)?
基本原理
由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產(chǎn)生熒光.
不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。
在溶液中,當熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標準曲線法進行。
基本結(jié)構(gòu)
1.光源:
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜,且在~范圍內(nèi)強度幾乎相等,故較常用。
2.激發(fā)單色器:
置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。
3.發(fā)射單色器:
置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。
4.樣品室:
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。
5.檢測器:
一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉(zhuǎn)為電信號。